Ensayo de ácido bicinconínico - Bicinchoninic acid assay
El ensayo de ácido bicinconínico ( ensayo BCA ), también conocido como ensayo de Smith , en honor a su inventor, Paul K. Smith en Pierce Chemical Company , ahora parte de Thermo Fisher Scientific, es un ensayo bioquímico para determinar la concentración total de proteína en un solución (0,5 μg / ml a 1,5 mg / ml), similar al ensayo de proteínas de Lowry , ensayo de proteínas de Bradford o reactivo de biuret . La concentración de proteína total se muestra mediante un cambio de color de la solución de muestra de verde a púrpura en proporción a la concentración de proteína, que luego se puede medir utilizando técnicas colorimétricas .
Mecanismo
Una solución madre de BCA contiene los siguientes ingredientes en un altamente alcalina solución con un pH 11.25: ácido bicinconínico , carbonato de sodio , bicarbonato de sodio , tartrato de sodio y cobre (II) sulfato pentahidrato.
El ensayo de BCA se basa principalmente en dos reacciones. Primero, los enlaces peptídicos en la proteína reducen los iones Cu 2+ del sulfato de cobre (II) a Cu 1+ (una reacción dependiente de la temperatura). La cantidad de Cu 2+ reducida es proporcional a la cantidad de proteína presente en la solución. A continuación, dos moléculas de ácido bicinconínico quelatan con cada ión Cu 1+ , formando un complejo de color púrpura que absorbe intensamente la luz a una longitud de onda de 562 nm .
El complejo de ácido bicinconínico Cu 1+ está influenciado en muestras de proteínas por la presencia de cadenas laterales de cisteína / cistina, tirosina y triptófano. A temperaturas más altas (37 a 60 ° C), los enlaces peptídicos ayudan en la formación del complejo de reacción. Se recomienda incubar el ensayo de BCA a temperaturas más altas como una forma de aumentar la sensibilidad del ensayo al tiempo que se minimizan las variaciones causadas por la composición desigual de aminoácidos.
La cantidad de proteína presente en una solución se puede cuantificar midiendo los espectros de absorción y comparándolo con soluciones de proteína de concentración conocida.
Ver también
Referencias
- Wiechelman, K .; Braun, R. y Fitzpatrick, J. (1988). "Investigación del ensayo de proteína de ácido bicinconínico: Identificación de los grupos responsables de la formación del color". Anal. Biochem . 175 (1): 231–7. doi : 10.1016 / 0003-2697 (88) 90383-1 . PMID 3245570 .
- Stoscheck, CM. (1990). "Cuantificación de proteínas". Métodos en enzimología . 182 : 50–69. doi : 10.1016 / 0076-6879 (90) 82008-P . ISBN 9780121820831. PMID 2314256 .