Portaobjetos de microscopio - Microscope slide
Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada y plana de vidrio , generalmente de 75 por 26 mm (3 por 1 pulgada) y de aproximadamente 1 mm de grosor, que se usa para sostener objetos para examinarlos con un microscopio . Por lo general, el objeto se monta (asegura) en el portaobjetos y luego ambos se insertan juntos en el microscopio para su visualización. Esta disposición permite que varios objetos montados en portaobjetos se inserten y retiren rápidamente del microscopio, se etiqueten, transporten y almacenen en estuches o carpetas de portaobjetos adecuados, etc.
Los portaobjetos de microscopio se utilizan a menudo junto con un cubreobjetos o cubreobjetos, una hoja de vidrio más pequeña y delgada que se coloca sobre la muestra. Los portaobjetos se mantienen en su lugar en la platina del microscopio mediante clips para portaobjetos, abrazaderas para portaobjetos o una mesa cruzada que se utiliza para lograr un movimiento remoto y preciso del portaobjetos sobre la platina del microscopio (como en un sistema automatizado / operado por computadora, o cuando se toca el portaobjetos con los dedos es inadecuado debido al riesgo de contaminación o por falta de precisión).
Historia
El origen del concepto fueron trozos de marfil o hueso , que contenían especímenes sostenidos entre discos de mica transparente , que se deslizarían por el hueco entre el escenario y el objetivo. Estos "deslizadores" eran populares en la Inglaterra victoriana hasta que la Royal Microscopical Society introdujo el portaobjetos de microscopio de vidrio estandarizado.
Dimensiones y tipos
Un portaobjetos de microscopio estándar mide aproximadamente 75 mm por 25 mm (3 "por 1") y tiene aproximadamente 1 mm de grosor. Hay disponible una gama de otros tamaños para diversos fines especiales, como 75 x 50 mm para uso geológico , 46 x 27 mm para estudios petrográficos y 48 x 28 mm para secciones delgadas . Los portaobjetos suelen estar hechos de vidrio común y sus bordes suelen estar finamente pulidos o pulidos.
Los portaobjetos de microscopio suelen estar hechos de vidrio de calidad óptica , como vidrio de cal sodada o vidrio de borosilicato , pero también se utilizan plásticos especiales. Los portaobjetos de cuarzo fundido se utilizan a menudo cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en microscopía de fluorescencia .
Si bien las diapositivas simples son las más comunes, existen varios tipos especializados. Un portaobjetos de concavidad o portaobjetos de cavidad tiene una o más depresiones poco profundas ("pozos"), diseñadas para contener objetos ligeramente más gruesos y ciertas muestras, como líquidos y cultivos de tejidos . Los toboganes pueden tener esquinas redondeadas para mayor seguridad o robustez, o una esquina recortada para usar con una abrazadera deslizante o una mesa cruzada, donde el tobogán está asegurado por un brazo curvo con resorte que hace contacto con una esquina, forzando la esquina opuesta de la deslice contra un brazo en ángulo recto que no se mueva. Si este sistema se utilizara con un tobogán que no incorpore estas esquinas recortadas, las esquinas se astillarían y el tobogán podría romperse.
Una diapositiva de retícula está marcada con una cuadrícula de líneas (por ejemplo, una cuadrícula de 1 mm) que permite estimar fácilmente el tamaño de los objetos vistos con aumento y proporciona áreas de referencia para contar objetos diminutos. A veces, un cuadrado de la cuadrícula se subdivide en una cuadrícula más fina. Los portaobjetos para aplicaciones especializadas, como los hemocitómetros para el recuento celular, pueden tener varios depósitos, canales y barreras grabados o pulidos en su superficie superior. El fabricante puede imprimir , pulir con chorro de arena o depositar varias marcas permanentes o máscaras en la superficie, generalmente con materiales inertes como el PTFE .
Un portaobjetos de Neubauer para el recuento celular.
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Imagen de microscopio de la retícula de un portaobjetos de Neubauer que se utiliza para contar células .
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Algunos portaobjetos tienen un área esmerilada o recubierta de esmalte en un extremo, para etiquetar con un lápiz o bolígrafo. Los portaobjetos pueden tener revestimientos especiales aplicados por el fabricante, por ejemplo, para la inercia química o la adhesión celular mejorada . El revestimiento puede tener una carga eléctrica permanente para contener muestras finas o en polvo. Los recubrimientos comunes incluyen poli-L-lisina , silanos , resinas epoxi o incluso oro .
Montaje
El montaje de muestras en portaobjetos de microscopio suele ser fundamental para una visualización satisfactoria. El problema ha recibido mucha atención en los dos últimos siglos y es un área bien desarrollada con muchas técnicas especializadas y, a veces, bastante sofisticadas. Las muestras se celebran a menudo en su lugar con los más pequeños de vidrio cubreobjetos .
La función principal del cubreobjetos es mantener las muestras sólidas planas y planas y las muestras líquidas en una capa plana de espesor uniforme. Esto es necesario porque los microscopios de alta resolución tienen una región muy estrecha dentro de la cual enfocan.
El cubreobjetos a menudo tiene otras funciones. Mantiene la muestra en su lugar (ya sea por el peso del cubreobjetos o, en el caso de una montura húmeda, por la tensión superficial ) y protege la muestra del polvo y el contacto accidental. Protege la lente del objetivo del microscopio para que no entre en contacto con la muestra y viceversa; En microscopía de inmersión en aceite o microscopía de inmersión en agua, el cubreobjetos evita el contacto entre el líquido de inmersión y la muestra. El cubreobjetos se puede pegar al portaobjetos para sellar la muestra, retardando la deshidratación y oxidación de la muestra y también previniendo la contaminación. Se utilizan varios selladores, incluidos los selladores comerciales, las preparaciones de laboratorio o incluso el esmalte de uñas transparente normal , según la muestra. Un sellador sin disolventes que se puede utilizar para muestras de células vivas es "valap", una mezcla de vaselina , lanolina y parafina en partes iguales. Los cultivos microbianos y celulares se pueden cultivar directamente en el cubreobjetos antes de colocarlo en el portaobjetos, y las muestras se pueden montar permanentemente en el portaobjetos en lugar de en el portaobjetos.
Los cubreobjetos están disponibles en una variedad de tamaños y espesores. El uso de un grosor incorrecto puede provocar una aberración esférica y una reducción de la resolución y la intensidad de la imagen. Se pueden usar objetivos especiales para obtener imágenes de muestras sin cubreobjetos, o pueden tener collares de corrección que permitan al usuario adaptarse a un grosor alternativo del cubreobjetos.
Montaje en seco
En un montaje en seco , el tipo de montaje más simple, el objeto simplemente se coloca en la diapositiva. Se puede colocar un cubreobjetos en la parte superior para proteger la muestra y el objetivo del microscopio y para mantener la muestra quieta y plana. Este montaje puede usarse con éxito para ver muestras como polen, plumas, pelos, etc. También se usa para examinar partículas atrapadas en filtros de membrana transparente (por ejemplo, en análisis de polvo en el aire ).
Montaje húmedo o montaje temporal
En un montaje húmedo , la muestra se coloca en una gota de agua u otro líquido retenido entre el portaobjetos y el cubreobjetos mediante la tensión superficial . Este método se usa comúnmente, por ejemplo, para ver organismos microscópicos que crecen en el agua de un estanque u otros medios líquidos, especialmente cuando se estudia su movimiento y comportamiento. Se debe tener cuidado de excluir las burbujas de aire que interferirían con la visualización y dificultarían los movimientos de los organismos. Un ejemplo de un montaje húmedo temporal es un montaje de lactofucsina , que proporciona tanto un montaje de muestra como una tinción fucsina .
Montaje preparado o montaje permanente
Para la investigación patológica y biológica , el espécimen suele ser sometido a una compleja preparación histológica que consiste en fijarlo para evitar la descomposición, retirar el agua que contenga, sustituir el agua por parafina , cortarlo en secciones muy finas con un micrótomo , colocar las secciones en un portaobjetos de microscopio, teñir el tejido usando varias tinciones para revelar componentes específicos del tejido, limpiar el tejido para hacerlo transparente y cubrirlo con un cubreobjetos y medio de montaje.
Monte esparcido
El montaje esparcido describe la producción de portaobjetos de microscopio palinológico suspendiendo una muestra concentrada en agua destilada , colocando las muestras en un portaobjetos y dejando que el agua se evapore .
Medios de montaje
El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la muestra, generalmente bajo un cubreobjetos. Los líquidos simples como el agua o el glicerol se pueden considerar medios de montaje, aunque el término generalmente se refiere a compuestos que se endurecen en un montaje permanente. Los medios de montaje populares incluyen Permount y el medio de montaje de Hoyer y una gelatina de glicerina alternativa Las propiedades de un buen medio de montaje incluyen tener un índice de refracción cercano al del vidrio (1.518), no reactividad con la muestra, estabilidad en el tiempo sin cristalización, oscurecimiento, o cambiar el índice de refracción, la solubilidad en el medio en el que se preparó la muestra (ya sea acuosa o no polar , como xileno o tolueno ), y no provocar que la mancha de la muestra se desvanezca o se filtre.
Ejemplos de medios de montaje
Acuoso
Se utiliza popularmente en citoquímica inmunofluorescente donde la fluorescencia no se puede archivar. El almacenamiento temporal debe realizarse en una cámara oscura y húmeda. Algunos ejemplos comunes son:
- Glicerol-PBS (9: 1) con anticongelante, por ejemplo, cualquiera de los siguientes
- p-fenilendiamina
- galato de propilo
- 1,4-diazabiciclo (2,2,2) -octano (DABCO) (muy popular)
- Ácido ascórbico
- Mowiol o Gelvatol
- Gelatina
- Montar
- Vectashield
- Prolongar el oro
- CyGEL / CyGEL Sustain (para inmovilizar células y organismos vivos, no fijos)
No acuoso
Se usa cuando se requiere un montaje permanente
- Permount (tolueno y un polímero de a-pineno, b-pineno, dipenteno, b-felandreno)
- Bálsamo de Canadá
- DPX ( D istrene 80 - un comercial de poliestireno , un p lasticizer por ejemplo, ftalato de dibutilo y xileno )
- DPX nuevo (con xileno pero libre de ftalato de dibutilo cancerígeno )
- Entellan (con tolueno)
- Entellan nuevo
- Medio de Hoyer de haluro de Hempstead (una formulación patentada del medio de Hoyer tradicional que contiene 60% de cloral , pero libre de carcinógenos conocidos)
- Neo-Mount (compatible con neo-clear alifático pero no compatible con disolventes aromáticos como el xileno)
En contraste con otros tipos / significados de "montaje"
A diferencia del montaje necesario para los cubreobjetos de vidrio, se puede realizar un montaje algo similar para la conservación de muestras más voluminosas en recipientes de vidrio en los museos. Sin embargo, se realiza un tipo de montaje completamente diferente para la preparación de muestras , que puede ser para materiales biológicos o no biológicos y se subdivide en procesos de montaje de tipo "caliente" (compresivo) y "frío" (moldeable). Aunque se denomina "montaje", es más parecido a incrustación en histología y no debe confundirse con el montaje descrito anteriormente. El término montaje en otros campos tiene muchos otros significados.