Prueba de indol - Indole test

La prueba de indol es una prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para determinar la capacidad del organismo para convertir triptófano en indol . Esta división se realiza mediante una cadena de varias enzimas intracelulares diferentes , un sistema generalmente denominado "triptofanasa".

Bioquímica

El indol se genera por desaminación reductora del triptófano a través de la molécula intermedia ácido indolpirúvico. La triptofanasa cataliza la reacción de desaminación, durante la cual se elimina el grupo amina (-NH 2 ) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son indol, ácido pirúvico , amonio (NH 4 + ) y energía. Se requiere fosfato de piridoxal como coenzima .

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Realización de una prueba

Prueba de indol positiva: aparición de una capa rosada en la parte superior (p. Ej., Escherichia coli )

Como muchas pruebas bioquímicas en bacterias, los resultados de una prueba de indol se indican mediante un cambio de color después de una reacción con un reactivo agregado.

El cultivo bacteriano puro debe cultivarse en caldo estéril de triptófano o peptona durante 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Después de la incubación, se añaden cinco gotas de reactivo de Kovac ( alcohol isoamílico , para-dimetilaminobenzaldehído , ácido clorhídrico concentrado ) al caldo de cultivo.

Un resultado positivo se muestra por la presencia de un color rojo o rojo violeta en la capa superficial de alcohol del caldo. Un resultado negativo aparece amarillo. También puede producirse un resultado variable que muestre un color naranja como resultado. Esto se debe a la presencia de escatol , también conocido como metil indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.

El color rojo positivo se forma como resultado de una serie de reacciones. El para-dimetilaminobenzaldehído reacciona con el indol presente en el medio para formar un tinte rosindol rojo. El alcohol isoamílico forma un complejo con el colorante rosindol, lo que hace que se precipite . El alcohol restante y el precipitado luego suben a la superficie del medio.

Se utiliza una variación de esta prueba con reactivo de Ehrlich (que usa alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico, desarrollado por Paul Ehrlich ) cuando se realiza la prueba en no fermentadores y anaerobios .

Bacterias indol positivas

Las bacterias que dan positivo en la división del indol del triptófano incluyen: Aeromonas hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (no P. mirabilis y P. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Enterococcus faecalis , Vibrio sp. y Lactobacillus reuteri .

Bacterias indol-negativas

Las bacterias que dan resultados negativos para la prueba de indol incluyen: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida , Alcaligenes sp., La mayoría de Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., La mayoría de Haemophilus sp., La mayoría de Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. y Rhizobium sp.

La prueba Indole es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC , que busca evidencia de una bacteria entérica. Las otras tres pruebas incluyen: la prueba del rojo de metilo [M], la prueba de Voges-Proskauer [V] y la prueba del citrato [C].

Referencias

  • MacFaddin, Jean F. "Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias médicas". Williams y Wilkins, 1980, págs. 173 - 183.
  • Ejemplo de reacciones típicas de indol
  • Angen, O .; Mutters, R .; Caugant, DA; Olsen, JE; Bisgaard, M. (1999). "Relaciones taxonómicas del complejo [Pasteurella] haemolytica evaluadas por hibridaciones de ADN-ADN y secuenciación de ARNr 16S con propuesta de Mannheimia haemolytica gen. Nov., Comb, nov., Mannheimia granulomatis comb. Nov., Mannheimia glucosida sp. Nov., Mannheimia ruminalis sp. Nov. Y Mannheimia varigena sp. Nov. ". Revista Internacional de Bacteriología Sistemática. 49 (1): 67–86. doi : 10.1099 / 00207713-49-1-67 . ISSN  0020-7713 . PMID  10028248