DAPI - DAPI
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| Nombres | |
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Nombre IUPAC
2- (4-amidinofenil) -1 H -indol-6-carboxamidina
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| Otros nombres
4 ', 6-diamidino-2-fenilindol
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| Identificadores | |
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Modelo 3D ( JSmol )
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| CHEBI | |
| CHEMBL | |
| ChemSpider | |
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PubChem CID
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Tablero CompTox ( EPA )
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| Propiedades | |
| C 16 H 15 N 5 | |
| Masa molar | 277,331 g · mol −1 |
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Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). |
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 verificar ( ¿qué es ?)
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| Referencias de Infobox | |
DAPI (pronunciado 'DAPPY', / ˈdæpiː /), o 4 ′, 6-diamidino-2-fenilindol , es una tinción fluorescente que se une fuertemente a regiones ricas en adenina - timina en el ADN . Se utiliza ampliamente en microscopía de fluorescencia . Como DAPI puede atravesar una membrana celular intacta , se puede utilizar para teñir células tanto vivas como fijas , aunque pasa a través de la membrana de manera menos eficiente en células vivas y, por lo tanto, proporciona un marcador de la viabilidad de la membrana.
Historia
DAPI se sintetizó por primera vez en 1971 en el laboratorio de Otto Dann como parte de una búsqueda de fármacos para tratar la tripanosomiasis . Aunque no tuvo éxito como fármaco, una investigación adicional indicó que se unió fuertemente al ADN y se volvió más fluorescente cuando se unió. Esto llevó a su uso para identificar ADN mitocondrial en ultracentrifugación en 1975, el primer uso registrado de DAPI como tinción de ADN fluorescente.
La fuerte fluorescencia cuando se une al ADN llevó a la rápida adopción de DAPI para la tinción fluorescente de ADN para microscopía de fluorescencia . Su uso para detectar ADN en células de plantas , metazoos y bacterias y partículas de virus se demostró a fines de la década de 1970, y la tinción cuantitativa del ADN dentro de las células se demostró en 1977. El uso de DAPI como tinción de ADN para citometría de flujo también se demostró en esta época. .
Propiedades de fluorescencia
Cuando se une a ADN de doble hebra, DAPI tiene un máximo de absorción a una longitud de onda de 358 nm ( ultravioleta ) y su máximo de emisión es de 461 nm (azul). Por lo tanto, para microscopía de fluorescencia, DAPI se excita con luz ultravioleta y se detecta a través de un filtro azul / cian. El pico de emisión es bastante amplio. DAPI también se unirá al ARN , aunque no es tan fuertemente fluorescente. Su emisión cambia a alrededor de 500 nm cuando se une al ARN.
La emisión azul de DAPI es conveniente para los microscopistas que desean utilizar múltiples tinciones fluorescentes en una sola muestra. Existe cierta superposición de fluorescencia entre DAPI y moléculas fluorescentes verdes como la fluoresceína y la proteína fluorescente verde (GFP), pero el efecto de esto es pequeño. El uso de la desmezcla espectral puede explicar este efecto si se requiere un análisis de imagen extremadamente preciso.
Fuera de la microscopía de luz de fluorescencia analítica, DAPI también es popular para el etiquetado de cultivos celulares para detectar el ADN de Mycoplasma o virus contaminantes . Las partículas de virus o micoplasma marcadas en el medio de cultivo emiten fluorescencia una vez teñidas con DAPI, lo que las hace fáciles de detectar.
Modelado de propiedades de absorción y fluorescencia.
Esta sonda fluorescente de ADN se ha modelado eficazmente utilizando la teoría funcional de densidad dependiente del tiempo , junto con la versión IEF del modelo continuo polarizable . Este modelado mecánico-cuántico ha racionalizado el comportamiento de absorción y fluorescencia dado por la unión e intercalación de surcos menores en la bolsa de ADN, en términos de una flexibilidad estructural y polarización reducidas.
Células vivas y toxicidad
DAPI se puede utilizar para la tinción de células fijas. La concentración de DAPI necesaria para la tinción de células vivas es generalmente muy alta; rara vez se usa para células vivas. Está etiquetado como no tóxico en su MSDS y, aunque no se demostró que tuviera mutagenicidad en E. coli , está etiquetado como un mutágeno conocido en la información del fabricante. Como es un pequeño compuesto que se une al ADN, es probable que tenga algunos efectos cancerígenos y se debe tener cuidado al manipularlo y desecharlo.
Alternativas
Las tinciones de Hoechst son similares a DAPI en que también son tinciones de ADN azul fluorescente que son compatibles con aplicaciones de células vivas y fijas, así como visibles utilizando la misma configuración de filtro de equipo que para DAPI.