La 83ª edición de la KNVB Cup (en ese momento llamada Amstel Cup ) comenzó el 8 de agosto de 2000. La final se jugó el 24 de mayo de 2001: el FC Twente venció al PSV en los penaltis (4-3), después de que no se anotaran goles durante tiempo oficial y extra. FC Twente ganó la copa por segunda vez. Participaron un total de 86 clubes.
Los 18 participantes de la Eredivisie 2000-01 : seis equipos entraron en los octavos de final de la fase eliminatoria; un equipo en la primera ronda de la fase eliminatoria y el resto en la fase de grupos
Los partidos de la fase de grupos se jugaron entre el 8 de agosto y el 13 de septiembre de 2000. Participaron 79 equipos y se disputaron 117 partidos. 39 equipos avanzaron a la siguiente ronda.
Los partidos de la primera ronda se jugaron los días 20 y 21 de septiembre de 2000. El RKC Waalwijk entró al torneo aquí, durante la fase de grupos todavía estaban activos en la Copa Intertoto .
Los partidos se jugaron entre el 24 y el 27 de enero de 2001. Los seis equipos de la Eredivisie que habían estado jugando en competiciones europeas después de la clasificación la temporada pasada , entraron al torneo en esta ronda.
